盐酸可乐定人工抗原的合成及鼠源多抗血清ELISA鉴定

doi:10.13652/j.issn.1003-5788.2021.07.012

首页 > 过刊浏览>2021年第37卷第7期 >76-80. DOI:10.13652/j.issn.1003-5788.2021.07.012

盐酸可乐定人工抗原的合成及鼠源多抗血清ELISA鉴定
DOI:
                        10.13652/j.issn.1003-5788.2021.07.012
                    
CSTR:
                        [cstr]
                    
作者:
                        
                        
                    
作者单位:(1. 河南科技大学食品与生物工程学院，河南 洛阳 471003;2. 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室，河南 郑州 450002;3. 西北农林科技大学动物医学院，陕西 咸阳 712100;4. 中国检验检疫科学研究院，北京 100176)
作者简介:王耀，男，河南科技大学副教授，博士。
通讯作者:胡骁飞（1972—），男，河南省农业科学院研究员，博士。E-mail：huxf1972@126.com
中图分类号:
基金项目:国家自然科学基金（编号：31702218）；国家级大学生创新创业训练计划（编号：202010464024）；河南省青年人才托举工程（编号：2020HYTP029）；河南省动物免疫学重点实验室开放课题（编号：PKLAI20170603）；河南省科技攻关（编号：182102110445）；河南省自然科学基金（编号：182300410038）；河南省农业科学院科研发展专项资金（编号：2019CY04）

Synthesis of artificial antigen and ELISA identification of mouse polyclonal antiserum against clonidine hydrochloride

Author:

Affiliation:

(1. Food and Bioengineering College, Henan University of Science and Technology, Luoyang, Henan 471003, China; 2. Key Laboratory of Animal Immunology, Henan Academy of Agricultural Sciences, Zhengzhou, Henan 450002, China; 3. College of Veterinary Medicine, Northwest A&F University, Xianyang, Shaanxi 712100, China; 4. Chinese Academy of Inspection and Quarantine, Beijing 100176, China)

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摘要:

目的：获得敏感性高，特异性强的新型瘦肉精盐酸可乐定（Clonidine hydrochloride，CLO）鼠源多抗血清。方法：以CLO的衍生物盐酸阿可乐定（Apraclonidine hydrochloride，ACLO）为半抗原，采用戊二醛法将ACLO分别与牛血清白蛋白（Bovine serum albumin，BSA）和鸡卵清蛋白（Ovalbumin，OVA）偶联，合成免疫抗原CLO-BSA和包被抗原CLO-OVA。采用紫外扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定其偶联效果后，免疫BALB/c小鼠，制备多抗血清。利用间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定其免疫学特性。结果：合成的人工抗原免疫效果较好，所获小鼠多抗血清效价均达到1∶12 800以上，其中3号小鼠敏感性最好，半数抑制质量浓度（IC₅₀）为82.75 ng/mL，与其他几种常见的瘦肉精类药物的交叉反应率均小于0.9%，特异性良好。结论：通过戊二醛法成功合成了高免疫原性的CLO人工抗原，并获得敏感性高，特异性强的CLO鼠源多抗血清。

Abstract:

Objective: The aim of this study was to obtain highly sensitive and specific mouse polyclonal antiserum of Clonidine hydrochloride (CLO). Methods: Apraclonidine (ACLO), a derivative of CLO, was acted as hapten of clonidine (CLO) to synthesize immune antigen CLO-BSA and envelope antigen CLO-OVA by glutaraldehyde (GA). The coupling effect was identified by ultraviolet scanning and polyacrylamide gel electrophoresis. Then, BALB/c mice were immunized and their immunological characteristics were identified by indirect ELISA and indirect competitive ELISA. Results: The titer of polyclonal antiserum of all mice were higher than 1∶12 800, and the polyclonal antiserum of No.3 mouse has the best sensitivity, the IC₅₀ was 82.75 ng/mL, and the cross reaction rate with several other common clenbuterol was all less than 0.9%. Conclusion: In this study, successfully synthesized the effective artificial antigen of CLO by GA method, and obtained the mouse polyclonal antibody of CLO with high sensitivity and specificity.

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引用本文

王耀,曹金博,李铁梅,等.盐酸可乐定人工抗原的合成及鼠源多抗血清ELISA鉴定[J].食品与机械,2021,37(7):76-80.
WANGYao, CAOJinbo, LITiemei, et al. Synthesis of artificial antigen and ELISA identification of mouse polyclonal antiserum against clonidine hydrochloride[J]. Food & Machinery,2021,37(7):76-80.

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收稿日期:2020-06-14
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在线发布日期: 2023-02-15
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